当前位置 :
【减少PCR产物中引物二聚体的方法?】
更新时间: 2025-08-22 16:48:55
1人问答
问题描述:

减少PCR产物中引物二聚体的方法?

陈怡疆回答:
  PCR反应过程中产生引物二聚体是做PCR的各位战友经常遇到的问题,下面介绍一些减少引物二聚体的方法:   1.从引物自身着手,重新设计引物,这是最根本解决这一问题的办法;   2.可能模板有问题;   3.模板浓度过小,适当加大模板量;   4.Taq酶,引物,Mg2+浓度可能过高,可降低它们的浓度;   5.取你所要加的上下游引物混合后,在100摄氏度下的沸水中煮5分钟,然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却,这时再加入反应体系当中,引物二聚体就会消失的;   6.所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO,可以增强特异性;   7.PCR反应体系的配制在冰上进行,最后加TAq酶,PCR结束后,产物勿放置在室温下过长时间,有人认为室温下有些TAQ酶会将多余的引物合成为二聚体;   8.增加循环数;   9.降低退火温度后有条带,则应逐渐提高温度,若提高温度的同时产物量减少,则考虑增加镁离子浓度(根据扩增片断长度而定,片段长则相应镁离子浓度应该高一些);   10.若降低退火温度,发现还是只有引物二聚体,而且镁离子的浓度在20-25mmol/l没有区别,则考虑Buffer等试剂没有完全融解、混匀,导致吸取的试剂浓度不对;   11.以上次的PCR产物作模板二次PCR,可以提高引物与模板的特异性,减少引物二聚体,如果两次时间间隔短的话,可以把原产物稀释100-1000倍,如果间隔较长可以稀释50-100倍.
生物推荐
生物推荐
最新更新
保卡通(baokatong.com)汇总了汉语字典,新华字典,成语字典,组词,词语,在线查字典,中文字典,英汉字典,在线字典,康熙字典等等,是学生查询学习资料的好帮手,是老师教学的好助手。
声明:本网站尊重并保护知识产权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果我们转载的作品侵犯了您的权利,请在一个月内通知我们,我们会及时删除。
Copyright©2009-2021 保卡通 baokatong.com 版权所有